國藥中生武招字（zì）第（2017）057號（hào）
招標內容：羞羞视频在线（hàn）生物製品研究所有限責任公司脊髓灰質炎（sabin株）單克隆抗體製備服務
1.目的
課題《sIPV的II型病毒抗原定量檢（jiǎn）測（cè）試劑盒研製》需要訂製（zhì）一株能夠區分識別sIPV的I型、II型、III型病毒（dú）的C抗原和D抗原的單克隆（lóng）抗體（最好（hǎo）抗體具有中和活性）.
2.範圍
僅用於羞羞视频在线生物製品（pǐn）研究所有限責任公司sIPV的II型病（bìng）毒D抗原單（dān）克隆抗體訂製服務。
3.內容
3.1合格的（de）投標人必須具備以下條件：
3.1.1、符合《中（zhōng）華人民（mín）共和國政府采購法》第二十二條規定的供（gòng）應（yīng）商。
3.2、具有病毒類疫苗單抗製作經（jīng）驗
3.2.1公司單抗製備（bèi）需有5年以（yǐ）上單抗（kàng）製備經驗
3.2.2項目負責人需具備5年（nián）以上抗體藥物研（yán）發管理經曆
3.2.3 抗體藥物研發（fā）團隊不少於30人（rén）
3.2.4 具有抗體高通量自動化篩選平台
4、其他資質要求：
4.1本（běn）次招標不接受聯合投標。
4.2本項目麵向（xiàng）大、中、小等各類供應商（shāng）采購，但不接受轉包（bāo）公司（sī）提供的服務。
4.3具有（yǒu）合（hé）法經營資質和認證認可資（zī）質。
4.4近3年無繳納稅收和社會保（bǎo）障（zhàng）資金的不良記錄（lù），有良好的商業信譽和較強（qiáng）的經濟能力。
4.5具有完善的質量管理體係及突發事件應急預案。
5、項目概況（kuàng）：
5.1、項（xiàng）目名稱：羞羞视频在线生物製品研（yán）究所脊髓灰（huī）質炎病毒（sabin株II型病毒）單克隆抗體製備服務（wù）
5.2、招標類型：脊髓灰質炎單抗定製合（hé）同，長期有效（xiào）
5.3、項目（mù）主要流程（chéng）、要（yào）求：
5.3.1服務流程：
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階段 |
內容 |
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１．免疫程序(大約75天左右) |
Ｔ－１：預取血５-８隻Balb/c純（chún）係小鼠。 Ｔ＋０：初免，10-100ug（完全佐劑），皮下多點注射。 Ｔ＋21：加強１，10-100ug（非完全佐劑），皮下多點注射（shè）。 Ｔ＋42：加強（qiáng）２，10-100ug（非完全佐劑），皮下多點注射。 Ｔ＋52：試取血，ELISA檢測滴度取滴度較高的（de）小鼠。 Ｔ＋72：終加強（qiáng），10-100ug（非完全佐劑），尾靜脈注射。 |
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２．融合： |
免疫75天後（終免（miǎn）疫３天後）的鼠脾細胞（bāo）和SP2/0骨髓瘤（liú）細胞融合。 |
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３．篩選陽性細胞（bāo）克隆：(大約（yuē）10-20天) |
融合後10-20天，經2-3次篩選，包括自身抗（kàng）原的陽性篩選和交叉抗原的陰（yīn）性篩選。 |
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４．克隆化及檢測（cè）：(大約10-20天) |
篩選後，兩（liǎng）次亞克隆，同時進行檢測。 |
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５．腹水方式製備單克隆抗體：(10-20天) |
選取多株，分別（bié）免疫兩隻（zhī）BALB/c小鼠提取2ml以上腹水。 |
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６．抗體（tǐ）純化：(大約7天) |
腹水經辛酸和硫酸銨兩步純化。 |
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說明: |
1: 免疫5－8隻 Balb/c純（chún）係小鼠。 2:選取高滴度免疫小鼠取脾細胞與骨（gǔ）髓瘤（liú）細胞融合。 3: 提供盡可能（néng）多的細胞克隆，並保證至少有3株是針對目的抗原的細胞株，但不能保證你們用該株細胞的抗體的後續開發的結果。 4: 提（tí）供多株（至少3株）單克隆細胞上清≥1ml/株，腹水≥2 ml/株。 5: 腹水純（chún）化後抗體ELISA效價≥1：20，000。 6:客戶提供抗原,抗原純度90%以上。 7: 所有的細胞株（包括特異及非特異的細胞株） 及抗體的知識產（chǎn）權歸羞羞视频在线生物製片研究所所有。 9:所有研究過程中產生的細胞株、抗體及（jí）文件要交付武（wǔ）漢生（shēng）物（wù）製品研究所有限責任公司。 10; 其他事宜,雙方進（jìn）行協商。 |
5.3.2具體雜交瘤細胞的篩選（xuǎn），亞克隆（lóng）及鑒定的要求：
5.3.2.1雜交瘤細（xì）胞的篩選和亞克隆（lóng）的要求
加（jiā） HAT 培養基於 96 孔板培養 。融（róng）合後細胞長滿 1 3 ～ 2 3 孔時 ,取培養上清采用間接ELISA 法，間接免疫（yì）熒光法 2 種方法對雜交瘤細胞進行篩選（直接用 Elisa（鋪4塊板子）先區分D和C ，再用間接免疫熒光法篩選），檢測（cè）其（qí）與（yǔ） D 、C 抗原的反應性,選取與 D 抗（kàng）原反（fǎn）應而（ér）與 C 抗原不反應的陽性孔雜（zá）交瘤細胞孔，並采用有限稀釋法對細胞進行 3 次亞克隆。
進一步以 Balb c 小鼠（shǔ）腹腔巨噬細胞為（wéi）飼養細胞進行亞克隆。經過至（zhì）少 3 次有限稀（xī）釋獲得均一陽性克（kè）隆。將克隆純化的雜交瘤細胞擴大培養,調（diào）整細胞（bāo）數（shù） 1 ×106 ～ 2 ×106/ mL, 取 1 mL 細胞懸液注入經液體石蠟預處（chù）理 2 周的（de） Balb/c 小鼠腹腔內（nèi）,收集（jí）腹水, -20 ℃保存。
5.3.2.2鑒定（dìng）的要（yào）求
5.3.2.2.1腹水的鑒定
腹水（shuǐ）抗體效價檢測 ELISA 測得抗體（tǐ）效價，中和抗（kàng）體效價，抗體亞（yà）型和蛋白總質量濃度。
腹（fù）水特異性鑒定 腹水抗體與Ⅱ型Sabin 株C 抗原和 Ⅰ 、Ⅲ型 Sabin 株病毒 C、D 抗原不發生交（jiāo）叉反應
5.3.2.2.2抗（kàng）體的鑒定
間接 ELISA 法和微量中和實驗檢測抗體效價；用Ⅰ型、Ⅱ型 、Ⅲ型 Sabin 株抗體包被 , 加（jiā） Sabin IPV 抗原(Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ型（xíng） D 抗原 ,Ⅱ型C 抗原),進行 ELISA 檢測抗原抗體反應性; 秋水仙素阻抑法分析雜交瘤細胞染色體; ELISA檢測（cè）抗體亞型; BCA 法測量蛋白含量。
5.3.3 最（zuì）終得到單（dān）抗的要（yào）求
最後得到單克隆抗（kàng）體 ,隻與脊灰病毒Ⅱ型 Sabin 株 D 抗原發生反應, 與脊灰（huī）病毒 Ⅱ型（xíng）Sabin 株 C 抗原 , Ⅰ型 Sabin 株（zhū） D 抗原和C抗原 , Ⅲ型（xíng） Pfizer 株D 抗（kàng）原和C抗原無交叉反應
5.4.融合後的篩選，羞羞视频在线生物製品研究（jiū）所有限責任公司可以派（pài）人員參與（yǔ）。
5.5.交付日期
項目（mù）簽訂後4個月內完成交付達到要求的單克隆（lóng）抗體。
5.6．單克隆抗體細胞株及抗體（tǐ）知識產權屬（shǔ）於（yú）羞羞视频在线生（shēng）物製品研究所有限責任公司
6.1報（bào）名截止日期：2017年06月09 日下午3:30時
6.2報名資質：投標（biāo）人持公（gōng）司營業執照（副本）、行業許可證、法人委托書、代（dài）理人身份證前來報名。
6.3此項目（mù）評標標準是以低價優先原則做為商務部分評選基礎，通（tōng）過評委綜合評選後確定中標推薦人。
6.4投標書需準（zhǔn）備3份，一（yī）正二副，所有投標方製（zhì）作標書中必須加入反商業賄賂承諾書。否則視為無效標書。
反商業賄賂承諾書.doc
7.發布人名稱：羞羞视频在线生（shēng）物製品研究所有限責任公司（sī）
7.1聯係地址：羞羞视频在线市江夏區黃金工（gōng）業（yè）園路一號
7.2聯係人：吳德鑫 汪 洋
報名郵箱（xiāng）：wangyang16@sinopharm.com
鄂（è）公網安備 42011502000782號